რომან კორონავირუსის (SARS-CoV-2) მულტიპლექსი რეალურ დროში PCR ნაკრები
ეს მეტად მგრძნობიარე, მზა გამოსაყენებელი PCR ნაკრები ხელმისაწვდომია ლიოფილიზირებულ ფორმატში (გაყინვის გამოშრობის პროცესი) გრძელვადიანი შენახვისთვის. ნაკრების ტრანსპორტირება და შენახვა შესაძლებელია ოთახის ტემპერატურაზე და სტაბილურია ერთი წლის განმავლობაში. პრემიქსის თითოეული მილი შეიცავს ყველა რეაგენტს, რომელიც საჭიროა PCR გამაძლიერებლად, მათ შორისაა რევერს-ტრანსკრიპტაზა, Taq პოლიმერაზა, პრაიმერები, ზონდები და dNTP სუბსტრატები. საჭიროა მხოლოდ დაამატოთ 13 იული გამოხდილი წყალი და 5 მლ მოპოვებული RNA შაბლონი, შემდეგ კი მისი გაშვება და გამრავლება შესაძლებელია PCR ინსტრუმენტებზე.
QPCR მანქანა უნდა აკმაყოფილებდეს შემდეგ მოთხოვნებს:
1. მოათავსეთ 8 ზოლიანი PCR მილის მოცულობა 0,2 მლ
2. აქვს ოთხზე მეტი გამოვლენის არხი:
არხი |
აღგზნება (ნმ) |
ემისია (ნმ) |
წინასწარ დაკალიბრებული საღებავები |
1 |
470 |
525 |
FAM, SYBR მწვანე I |
2 |
523 |
564 |
VIC, HEX, TET, JOE |
3 |
571 |
621 |
ROX, TEXAS-RED |
4 |
630 |
670 |
CY5 |
PCR- პლატფორმები:
7500 რეალურ დროში PCR სისტემა, Biorad CF96, iCycler iQ ™ რეალურ დროში PCR გამოვლენის სისტემა, Stratagene Mx3000P, Mx3005P
რომან კორონავირუსის ნუკლეინის მჟავის გამოვლენის რეაგენტის ცივი ჯაჭვის ტრანსპორტირების სირთულე
როდესაც ჩვეულებრივი ნუკლეინის მჟავების აღმომჩენი რეაგენტები ტრანსპორტირდება დიდ მანძილზე, საჭიროა (-20 ± 5) ℃ ცივი ჯაჭვის შენახვა და ტრანსპორტირება, რათა უზრუნველყოს რეაქტივებში ფერმენტის ბიოაქტიური მოქმედება. იმისათვის, რომ დავრწმუნდეთ, რომ ტემპერატურა სტანდარტს მიაღწევს, ნუკლეინის მჟავის ტესტირების თითოეული კოლოფისთვის საჭიროა 50 კილოგრამი მშრალი ყინული 50 გ-ზე ნაკლებიც, მაგრამ ის შეიძლება გაგრძელდეს მხოლოდ ორი ან სამი დღე. ინდუსტრიის პრაქტიკის გათვალისწინებით, მწარმოებლების მიერ გაცემული რეაგენტების რეალური წონა არის კონტეინერის 10% -ზე ნაკლები (ან ამ მნიშვნელობაზე გაცილებით ნაკლებია). წონის უმეტესი ნაწილი მოდის მშრალი ყინულის, ყინულის პაკეტებისა და ქაფის ყუთებისგან, ამიტომ ტრანსპორტირების ღირებულება ძალიან მაღალია.
2020 წლის მარტში COVID-19 დაიწყო ფართომასშტაბიანი აფეთქება საზღვარგარეთ და მოთხოვნა Novel Coronavirus ნუკლეინის მჟავის გამოვლენის რეაგენტზე მკვეთრად გაიზარდა. ცივი ჯაჭვში რეაგენტების ექსპორტის მაღალი ღირებულების მიუხედავად, მწარმოებლების უმეტესობას მაინც შეუძლია მიიღოს იგი დიდი რაოდენობით და დიდი მოგების გამო.
ამასთან, ანტიანდემიური პროდუქტების ეროვნული საექსპორტო პოლიტიკის გაუმჯობესებასთან, აგრეთვე ხალხის ნაკადის და ლოგისტიკის ეროვნული კონტროლის განახლებით, რეაგენტების ტრანსპორტირების დროში გაფართოება და გაურკვევლობა შეიქმნა, რამაც გამოიწვია პროდუქტის გამოჩენილი პრობლემები ტრანსპორტირებით. ტრანსპორტირების გახანგრძლივებული დრო (ტრანსპორტირების დრო დაახლოებით ნახევარი თვე ძალიან ხშირია) იწვევს პროდუქტის ხშირ ჩავარდნებს, როდესაც პროდუქტი მიაღწევს კლიენტს. ამან შეაწუხა ნუკლეინის მჟავა რეაგენტების საექსპორტო საწარმოების უმეტესობა.
PCR რეაგენტის ლიოფილიზირებული ტექნოლოგია დაეხმარა რომანის კორონავირუსის ნუკლეინის მჟავის გამოვლენის რეაგენტის ტრანსპორტირებას მსოფლიოში
ლიოფილიზებული PCR რეაგენტების ტრანსპორტირება და შენახვა შესაძლებელია ოთახის ტემპერატურაზე, რამაც შეიძლება არამარტო შეამციროს ტრანსპორტირების ღირებულება, არამედ თავიდან აიცილოს ტრანსპორტირების პროცესით გამოწვეული ხარისხის პრობლემები. ამიტომ, რეაგენტის ლიოფილიზაცია საექსპორტო ტრანსპორტირების პრობლემის გადაჭრის საუკეთესო გზაა.
ლიოფილიზაცია გულისხმობს ხსნარის მყარ მდგომარეობაში გაყინვას, შემდეგ კი ვაკუუმის პირობებში წყლის ორთქლის sublimate და გამოყოფას. გამხმარი ხსნადი იგივე შემადგენლობითა და აქტივობით რჩება კონტეინერში. ჩვეულებრივ თხევადი რეაგენტებთან შედარებით, Liming Bio- ს მიერ წარმოებული სრული კომპონენტის ლიოფილიზებული Novel Coronavirus ნუკლეინის მჟავის გამოვლენის რეაქტივს აქვს შემდეგი მახასიათებლები:
ძალიან ძლიერი სითბოს სტაბილურობა: მას შეუძლია დაადგინოს მკურნალობა 56 at 60 დღის განმავლობაში, ხოლო რეაგენტის მორფოლოგია და მოქმედება უცვლელი რჩება.
ნორმალური ტემპერატურის შენახვა და ტრანსპორტირება: არ გჭირდებათ ცივი ჯაჭვი, არ არის საჭირო დაბალ ტემპერატურაზე შენახვა დალუქვამდე, სრულად გაათავისუფლეთ ცივი საცავის ადგილი.
გამოსაყენებლად მზა: ყველა კომპონენტის ლიოფილიზაცია, სისტემის კონფიგურაციის საჭიროება არ არის, მაღალი სიბლანტის მქონე კომპონენტების დაკარგვის თავიდან აცილება, როგორიცაა ფერმენტი.
მულტიპლექსის სამიზნეები ერთ მილში: გამოვლენის სამიზნე მოიცავს კორონავირუსის რომან ORF1ab გენს, N გენს, S გენს, ვირუსის გენოვაციის თავიდან ასაცილებლად ცრუ ნეგატივის შესამცირებლად, ადამიანის RNase P გენი გამოიყენება როგორც შიდა კონტროლი, ისე რომ დააკმაყოფილოს ნიმუშის ხარისხის კონტროლის კლინიკური მოთხოვნილება.